細(xì)胞凍存程序降溫儀介紹與步驟！

    在細(xì)胞培養(yǎng)檢測(cè)實(shí)驗(yàn)在實(shí)驗(yàn)儀器、培養(yǎng)基等等工作上都要耗費(fèi)不少的人力和體力。好在很久以前就有高人發(fā)明了細(xì)胞保存這個(gè)實(shí)驗(yàn)步驟，將暫時(shí)多出來的細(xì)胞冰凍保存，以zui大程度保存細(xì)胞活力。

一、細(xì)胞冷凍保存
1.  材料：
生長良好之培養(yǎng)細(xì)胞、新鮮培養(yǎng)基、DMSO (Sigma D-2650)、無菌塑料冷凍保存管(Nalgene　5000-0020)、0.  4%(w/v)trypan blue(GibcoBRL15250-061)、血球計(jì)數(shù)盤與蓋玻片、細(xì)胞凍存程序儀(也稱為程序降溫儀，品牌上海拓紛)
2.  冷凍保存方法：
(1)傳統(tǒng)方法: 冷存管置于4 ℃10分鐘--->-20 ℃30分鐘--->-80 ℃ 16～18小時(shí)(或隔夜)--->液氮槽vaporphase長期儲(chǔ)存。
-20 ℃不可超過1小時(shí)，以防止胞內(nèi)冰晶過大，造成細(xì)胞大量死亡，亦可跳過此步驟直接放入-80 ℃冰箱中，惟存活率稍微降低一些。
(2)程序降溫：利用已設(shè)定程序的等速細(xì)胞凍存程序儀以-1～-3 ℃/分鐘之速度由室溫降至(-80 ℃以下)-120 ℃，再放在液氮槽vaporphase長期儲(chǔ)存。適用于懸浮型細(xì)胞與hybridoma之保存。
3.  步驟：
(1)冷凍前24-48小時(shí)更換半量或全量培養(yǎng)基，使細(xì)胞處于指數(shù)生長期。
(2)配制冷凍保存溶液(使用前配制)：另取一離心管，加入培養(yǎng)基、血清，逐滴加入二甲基亞砜 (DMSO)至20%濃度，即制成雙倍的凍存液，置于室溫下待用。
(3)離心收集培養(yǎng)之細(xì)胞，用加血清的培養(yǎng)基重懸起細(xì)胞，取少量細(xì)胞懸浮液(約0.  1 ml)計(jì)數(shù)細(xì)胞濃度及凍前存活率。
(4)取與細(xì)胞懸液等量的凍存液，緩慢逐滴加入細(xì)胞懸液，并晃動(dòng)試管，制成細(xì)胞凍存懸液(DMSOzui后濃度為5～10%)，使細(xì)胞濃度為1～5×106cells/ ml，混合均勻，分裝于已標(biāo)示*之冷凍保存管中，1～2 ml/vial，并取少量細(xì)胞懸浮液作污染檢測(cè)。嚴(yán)密封口后，注明細(xì)胞名稱、代數(shù)、日期。然后進(jìn)行凍存。

    程序控制冷凍裝置俗稱：程序降溫儀，也稱為程序冷凍儀、胚胎冷凍儀、細(xì)胞冷凍儀、程控降溫儀；廣泛用于凍存細(xì)胞、胚胎等。采用微機(jī)控制技術(shù)，軟件，能較準(zhǔn)確地控制液氮的施放量，從而保證被凍存的生物制品以適宜的冷凍速率降溫冷凍。該儀器具有操作簡(jiǎn)便、人機(jī)界面清楚。 

  我國臨床低溫醫(yī)學(xué)工作發(fā)展迅速，促進(jìn)了移植醫(yī)學(xué)的發(fā)展，特別是在骨髓、造 血干細(xì)胞、皮膚、角膜、內(nèi)分泌腺體、以及血管和瓣膜等的冷凍保存和移植應(yīng)用取 得了顯著成績。成功的造血干細(xì)胞移植依賴于造血干細(xì)胞活力的保存。生物樣品在 降溫冷凍過程中，當(dāng)由液態(tài)向固態(tài)變化的相變期內(nèi)會(huì)釋放一定熱量，使其溫度回升， 不控制降溫速率的冷凍過程將會(huì)導(dǎo)致組織細(xì)胞死亡。準(zhǔn)確地測(cè)定生物樣品的相變點(diǎn)， 用微機(jī)編制降溫程序，以便在樣品相變時(shí)加大液氮輸入量，克服相變樣品溫度的回 升，使細(xì)胞安全而迅速地度過相變期，這是提高被凍樣品成活率的關(guān)鍵環(huán)節(jié)。

 ☆主要技術(shù)指標(biāo)☆
     溫度控制范圍:40℃~-180℃.
     溫度精度:    誤差<1℃
     降溫速度:    0.1℃/分~50℃/分范圍內(nèi)可選
     升溫速度:    0.1℃/分~30℃/分范圍內(nèi)可選

☆儀器結(jié)構(gòu)☆:本儀器由以下四部分構(gòu)成(標(biāo)準(zhǔn)配置):
溫控系統(tǒng)：在機(jī)箱上配置高精度智能溫控器，該溫控器通過RS485通訊協(xié)議和電腦連接；
電腦軟件：在電腦中運(yùn)行上位機(jī)軟件，即可設(shè)定控溫程序，對(duì)箱體控溫；
冷凍箱:  內(nèi)外全不銹剛結(jié)構(gòu).冷凍容機(jī)不小于200*200*200毫米.可同時(shí)容納冷凍管160個(gè)或血袋8個(gè).
液氮罐及液氮加壓器: 液氮加壓器安裝在30立升的液氮罐上,使罐內(nèi)自增壓,調(diào)節(jié)閥保持壓力穩(wěn)定.
☆軟件功能☆
1、顯示功能:
運(yùn)行顯示如圖：.每步操作,每個(gè)功能都有屏幕顯示.實(shí)時(shí)顯示儀器工作狀態(tài)﹑溫度數(shù)據(jù)和曲線.

2、 編程功能:
可編制任意段數(shù)的用戶程序.計(jì)算機(jī)按照用戶程序控制冷凍過程.用戶程序可方便地編制﹑修改﹑存儲(chǔ)﹑調(diào)出.開機(jī)自動(dòng)調(diào)出當(dāng)前用戶程序.
3、運(yùn)行控制功能:
隨機(jī)恒溫功能: 可隨時(shí)進(jìn)入,隨時(shí)解除恒溫。
自動(dòng)控制：設(shè)定程序后，可*自動(dòng)運(yùn)行。
手動(dòng)控制: 程控時(shí)手控可參與控制.也可*手控。
4、數(shù)據(jù)處理功能
每次冷凍的全部數(shù)據(jù)和有關(guān)信息,都能自動(dòng)形成一個(gè)數(shù)據(jù)文件存儲(chǔ)下來;
溫度數(shù)據(jù)和速度可按時(shí)間間隔列表或顯示溫度曲線.
可迅速方便地雙向檢索已存入的數(shù)據(jù)文件;
溫度曲線可局部放大,便于研究關(guān)鍵段的細(xì)微變化;
還有一些功能恕不一一列出,這些功能如能配合使用,將為您的冷凍帶來極大的方便.
5、軟件升級(jí)
  隨著公司軟件不斷的更新,用戶可享受免費(fèi)升級(jí)服務(wù).
 
詳細(xì)配置清單